Pour ce nouvel épisode, qui opposera toujours les Lycans aux vampires, Kate Beckinsale, qui portait les deux premiers films sur ses épaules, devrait reprendre son rôle. La comédienne n'avait participé au troisième film qu'à travers une voix off. Cependant, l'actrice qui faisait partie du jury de Tim Burton à Cannes cette année, ne reviendrait que pour un petit rôle. En effet, son personnage, Seline, devrait faire une courte apparition pour passer le flambeau à l'une de ses deux filles.
Par ailleurs, c'est à nouveau Len Wiseman, le mari de l'actrice, qui s'occupera de la mise en scène. Le réalisateur américain était déjà derrière la caméra pour les deux premiers films, mais avait laissé sa place à Patrick Tatopoulos pour le troisième volet.